糖化血紅蛋白檢測是糖尿病診斷與長期血糖控制評估的標(biāo)準(zhǔn),而基于離子交換層析原理的糖化血紅蛋柱管因其成本低、操作簡便,仍在基層醫(yī)療和資源有限地區(qū)廣泛應(yīng)用。盡管看似操作簡單,但若使用不規(guī)范,易導(dǎo)致結(jié)果偏差、重復(fù)性差甚至誤診。掌握
糖化血紅蛋柱管科學(xué)、嚴謹?shù)氖褂梅椒?,是實現(xiàn)分離清晰、定量準(zhǔn)確、結(jié)果可靠的關(guān)鍵。

一、使用前準(zhǔn)備:三查三凈原則
查試劑有效期:確認柱管、溶血劑、洗脫液均在有效期內(nèi),無沉淀或變色;
查樣本狀態(tài):全血樣本應(yīng)EDTA抗凝,無溶血、脂血或凝塊,采集后7天內(nèi)檢測;
查環(huán)境條件:室溫穩(wěn)定(18–25℃),避免陽光直射或強氣流干擾層析過程。
二、規(guī)范操作流程
樣本預(yù)處理
取適量全血(通常25–50μL)加入溶血劑中,充分混勻,靜置5–10分鐘使紅細胞裂解;
混合液需澄清透明,若有絮狀物應(yīng)離心(3000rpm,5min)取上清。
上樣與層析
輕輕顛倒柱管使填料均勻沉降,打開下端塞子讓緩沖液自然流出至填料表面;
用移液器緩慢將溶血液沿管壁加入柱中,切勿沖散填料層;
待樣本滲入填料后,加入第一種洗脫液(通常為低離子強度緩沖液),洗脫HbA0等非糖化組分;
再加入第二種洗脫液(高離子強度),洗脫HbA1c組分,收集對應(yīng)洗脫液于比色管中。
比色測定
用分光光度計在指定波長(如415nm)測定各組分吸光度;
按公式計算:HbA1c%=(HbA1c吸光度/總血紅蛋白吸光度)×100%;
建議每批檢測包含質(zhì)控樣本(正常/異常水平)以驗證準(zhǔn)確性。
三、質(zhì)量控制建議
每月參與室間質(zhì)評(EQA),確保結(jié)果可比性;
建立室內(nèi)質(zhì)控圖,監(jiān)控批內(nèi)/批間變異系數(shù)(CV應(yīng)<5%);
若結(jié)果與臨床不符(如HbA1c與指尖血糖差異過大),應(yīng)復(fù)查或改用HPLC/免疫法確認。